In Assassin's Creed: Brotherhood zal Ezio, samen met zijn broeders in de orde van de Assassin's proberen om de kwaadaardige Tempeliers uit hun laatste fort in Rome te verdrijven. Je zult als Master Assassin leiderschap en moed moeten tonen, maar vooral samen moeten werken met je broeders om deze dodelijke vijanden voor eens en altijd te verslaan.
Ook zul je voor het eerst in multiplayer de free-roam actie tegen andere spelers uit kunnen proberen. Dit zul je verhaaltechnisch doen in de vele Animus machines die het Tempeliersbedrijf Abstergo in hun gigantische laboratorium heeft staan. Je doelwit is om de vaardigheden van de Assassin's te leren zodat je deze tegen ze kunt gebruiken. Spelers zullen uit een assortiment aan unieke karakters met verschillende wapens kunnen kiezen om andere spelers mee te verslaan.
